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很多客戶都很了解聚丙烯酰胺的作用及特點，但是聚丙烯酰胺凝膠電泳有不少客戶會疑惑什么是聚丙烯酰胺凝膠電泳，又有什么作用呢？聚丙烯酰胺簡稱PAM、結(jié)構(gòu)式為[－CH2－CH(CONH2)]n－，分子量100～ 500萬。聚丙烯酰胺主要有兩種商品形式，一種是粉末狀的，另一種是膠體，還有聚丙烯酰胺乳液(上海合成樹脂研究所研制)。易溶于冷水，速度很慢，高分子量的聚丙烯酰胺當(dāng)濃度超過10%以后．就會形成凝膠狀結(jié)構(gòu)。提高溫度可以稍微促進溶解，但溫度不得超過50℃，以防發(fā)生分子降解。難溶于有機溶劑。溫度超過120 ℃時分解。中性。無毒。用作增稠劑、絮凝劑、減阻劑，具有凝膠、沉降、補強等作用。貯存于陰涼、通風(fēng)、干燥的庫房內(nèi)，防潮、避光、防熱．存放時間不宜過長。
聚丙烯酰胺凝膠電泳;polyacrylamide gel electrophoresis;PAGE用聚丙烯酰胺為支持基質(zhì)的電泳程序。一般說來，實現(xiàn)聚丙烯酰胺凝膠電泳有兩種類型。(1)單向電泳：采用完整的蛋白質(zhì)或用十二烷基磺酸鈉(SDS)處理的蛋白質(zhì)的單向泳動，在有凝膠的平板上平行分離(過去也有用在玻管中的圓筒形棒狀凝膠進行電泳的，現(xiàn)已很少有人使用)。(2)雙向電泳：首先用天然蛋白質(zhì)進行分離，然后凝膠平板再用SDS處理，樣品便在第二向得到分離。第一次分離了各種各樣的蛋白質(zhì)，因此第二向分離的是蛋白質(zhì)亞基。主要優(yōu)點是：(1)合成聚合物，故重復(fù)性良好；(2)分離能力好；(3)通過增減丙烯酰胺單體和交聯(lián)劑(N,N′-亞甲基雙丙烯酰胺)的濃度，可以調(diào)節(jié)凝膠的孔徑大��；(4)操作簡便、時間短；(5)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、機械性能好，柔軟；(6)在酸性或堿性緩沖液中均可進行電泳，而且可加入兩性電解質(zhì)進行等電點電泳，可用含電解質(zhì)表面活性劑(SDS)或非電解質(zhì)表面活性劑(Np40、Tritonx-100等)的凝膠進行電泳，亦可使兩者組合進行雙向電泳等等，使用范圍廣泛，利用價值日益提高；(7)由于染色技術(shù)的進步，可以進行定量，也可檢測出極微量的斑點(瓊脂糖電泳)。
SDS是陰離子去污劑，作為變性劑和助溶試劑，它能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白分子的二、三級結(jié)構(gòu)。而強還原劑如巰基乙醇，二硫蘇糖醇能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS后，分子被解聚成多肽鏈，解聚后的氨基酸側(cè)鏈和SDS結(jié)合成蛋白- SDS膠束，所帶的負(fù)電荷大大超過了蛋白原有的電荷量，這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結(jié)構(gòu)差異。SDS-PAGE一般采用的是不連續(xù)緩沖系統(tǒng)，與連續(xù)緩沖系統(tǒng)相比，能夠有較高的分辨率。 濃縮膠的作用是有堆積作用，凝膠濃度較小，孔徑較大，把較稀的樣品加在濃縮膠上，經(jīng)過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至一個狹窄的區(qū)帶。當(dāng)樣品液和濃縮膠選TRIS/HCL緩沖液，電極液選TRIS/甘氨酸。電泳開始后，HCL解離成氯離子，甘氨酸解離出少量的甘氨酸根離子。蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，因此一起向正極移動，其中氯離子最快，甘氨酸根離子最慢，蛋白居中。電泳開始時氯離子泳動率最大，超過蛋白，因此在后面形成低電導(dǎo)區(qū)，而電場強度與低電導(dǎo)區(qū)成反比，因而產(chǎn)生較高的電場強度，使蛋白和甘氨酸根離子迅速移動，形成以穩(wěn)定的界面，使蛋白聚集在移動界面附近，濃縮成一中間層。 此鑒定方法中，蛋白質(zhì)的遷移率主要取決于它的相對分子質(zhì)量，而與所帶電荷和分子形狀無關(guān)。
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